国药试剂带您了解，小接头的大奥秘！

作为罗氏诊断生命科学事业部在华东区的一级授权经销商，国药试剂为您推荐优质产品UMI。

接头连接是二代测序文库制备的重要环节，接头连接效率是影响文库质量和产量的重要指标之一，它直接影响最终文库的多样性以及低频突变检测的准确性UMI。随着测序仪的不断迭代，接头设计也在不断升级，种类更加多样化。

接头结构

接头作为文库的必要组成部分，以illumina接头为例，一般包括P5/P7、Index以及R1 SP/R2 SP序列，长约60bp左右（不同种类的接头长度有所不同）UMI。其中P5/P7序列与测序芯片上的P5/P7序列互补，通过锚定将待测片段固定在flow cells上进行桥式PCR扩增；Index又称为样本标签，目的是给文库加上特定的标签，用于文库混合测序时区分不同的文库样本；R1 SP/R2 SP是Read1和Read2测序引物结合的区域，在dNTP和DNA聚合酶的作用下进行碱基延伸。下图是接头的一般结构，呈“Y”字型。

接头一般结构（图片来源：罗氏诊断整理）

接头种类

罗氏测序样本制备解决方案提供兼容illumina仪器的全套KAPA接头产品组合(图2)，按照接头连接方式分为全长接头和截短接头UMI。

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罗氏KAPA接头产品（图片来源：罗氏诊断整理）

全长接头

KAPA UDI Adapters：是一种由P5/P7、96种独特双端Index以及R1 SP/R2 SP序列组成的全长接头，适用于PCR-free文库制备流程UMI。

截短接头

截短接头仅包括R1 SP/R2 SP序列，P5/P7和Index序列需通过引物扩增连入接头UMI。 KAPA HyperPlex Adapters是一套完整的接头组合产品：

KAPA Universal Adapter： 截短型双端通用接头UMI，适用于非低频突变检测

KAPA Universal UMI Adapter： 带有UMI（Unique Molecular Identifiers）的截短型双端通用接头UMI，适用于低频突变检测

KAPA UDI Primer Mixes 1-384： 搭配两种KAPA通用短接头使用UMI，实现高达384种Index组合的高通量混样测序

接头攻略

独特双端标签设计UMI，有效剔除标签

错配序列

多重混样测序时，有时会发生接头标签序列错配的问题，进而导致测序数据质量的下降和结果可信度的降低UMI。错配的风险主要由以下原因引发： 1）测序仪工作时发生的标签跳跃/转换现象 2）标签试剂或者样品间的交叉污染 3）混合样品在PCR扩增时发生模板调换 4）测序或数据分析错误

UMI标签设计UMI，提高低频突变检测准确性

低频突变检测在肿瘤研究，特别是液体活检研究方面至关重要，但在文库构建、靶向富集和测序过程中引入的突变会阻碍低频变异检测的准确性，UMI标签可以对原始样本进行分子标记，有利于后续在数据分析时对原始样本进行追踪和分组，从而对假阳性突变进行校正UMI。

KAPA Universal UMI Adapter采用罗氏专有设计，可防止因UMI序列发生错误导致样本追踪错误，在性能上表现出更高的双链回收率和更低的错误率UMI。

截短型KAPA HyperPlex接头可以获得

更高的文库产量

KAPA HyperPlex接头扩增效率高，文库转化率高，可以在较少的扩增循环数下得到较高的文库产量，其文库产量几乎是全长接头的两倍UMI。

满足实验所需文库产量的情况下，较少的扩增循环可以增加文库多样性并减少PCR重复序列UMI。

产品编号

产品名称

测试数

KAPA Universal Adapter,15uM 960 uL

KAPA 双端通用接头,15uM 960 uL

960

KAPA Universal UMI Adapter-G

KAPA通用UMI接头,960 uL

96

KAPA UDI Adapters 15uM

KAPA独立双端标

20*96

KAPA UDI Primer Mixes,1-96,96 rxn

KAPA双端标记引物,1-96,96

96

KAPA UDI Primer Mixes (97-192)-G

KAPA UDI引物预混液 97-19

96

KAPA UDI Primer Mixes (193-288)-G

KAPA UDI引物预混液 193-288,96反应

96

KAPA UDI Primer Mixes (289-384)-G

KAPA UDI引物预混液 289

96

更多产品信息 请咨询沃凯药业销售人员

国药试剂与生命科学领域众多一流品牌合作，包括Cytiva®、Roche®、Cell Signaling Techenology®(CST)等，为您提供从研发到生产的一站式解决方案UMI。

上海沃凯药业有限公司（原国药试剂生命科学部）

技术邮箱：sj_lifescience@sinopharm.com

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